柯萨奇病毒A组16型衣壳蛋白VP1的原核表达及初步活性测定

目的:原核表达柯萨奇病毒A组16型(CVA16)衣壳蛋白VP1,以便于研制血清学检测试剂。方法:在基因库中钓取CVA16-VP1的全长序列,采用PCR逐步合成法合成其全长基因,测序正确后克隆到表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a(+)/VP1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化;建立捕获免疫酶联法检测IgM抗体,检测20份手足口病阳性血清和30份阴性血清,评价重组抗原的灵敏度和特异性;采用CVA16全病毒免疫的抗小鼠血清进行Western印迹。结果:重组CVA16-VP1蛋白在大肠杆菌中获得高效表达;用重组蛋白抗原检测,20份手足口病患儿阳性血清中有4份阳性,其中1份同时为肠道病毒71型(EV71)VP1阳性,30份阴性血清无反应。结论:实现了CVA16-VP1的高效表达,初步结果显示重组蛋白具有较好的抗原性,为柯萨奇病毒A组16型诊断试剂的研究奠定了基础。     

基于硫醇自组装的肌红蛋白单克隆抗体金膜固相载体的构建

为了在金膜固相载体上固定肌红蛋白单克隆抗体 (MbAb),通过在金膜上生长一层巯基酸和巯基醇的混合自组装分子膜 (SAMs),用原子力显微镜 (AFM) 和X射线光电子能谱仪 (XPS) 分析样品的性质,再以1-(3-二甲基氨基丙基) 3-乙基碳化二亚胺盐酸 (EDC·HCl) 作为催化剂,自组装膜和抗体的氨基发生偶联反应,将抗体固定在金膜表面,并进行肌红蛋白抗原 (MbAg) 的测定。结果显示,通过条件优化实验,发现50 mmol/L的巯基16酸和巯基11醇混合乙醇溶液,60 ℃处理金膜3 h后,再偶联